Термочувствительная щелочная фосфатаза Thermo Scientific FastAP катализирует высвобождение 5'- и 3'-фосфатных групп из ДНК, РНК и нуклеотидов. Этот фермент также удаляет фосфатные группы из белков.

FastAP — это новая щелочная фосфатаза, которая активна во всех буферах ферментов рестрикции Thermo Scientific, а также в буферах ПЦР. Она дефосфорилирует все типы концов ДНК (тупые, 5'- и 3'-выступы) за 10 минут при 37 °C. Фермент инактивируется за 5 минут при 75 °C ( см. Рисунок 1 в разделе «Дополнительные данные»). Поэтому удаление щелочной фосфатазы перед лигированием не требуется.

Основные моменты

• Рекомбинантный фермент
• Быстрое дефосфорилирование — 10 минут при 37°C
• Быстрая и полная инактивация — 5 минут при 75°C
• Одновременное переваривание и дефосфорилирование векторной ДНК
• 100% активность в рестриктазах и буферах ПЦР
• Очистка ПЦР совместно с Exo I
• Дефосфорилирование белка

Один протокол для всех типов концов ДНК:
• 5'-выступы
• 3'-выступы
• тупые концы
• отдельные нуклеотиды

Применения

• Дефосфорилирование клонированной векторной ДНК для предотвращения рециркуляризации во время лигирования
• Одновременное переваривание и дефосфорилирование векторной ДНК
• Очистка продукта ПЦР: деградация нуклеотидов перед секвенированием продукта ПЦР
• Дефосфорилирование 5'-концов нуклеиновой кислоты перед маркировкой полинуклеотидкиназой Т4
• Другие приложения, где необходимо дефосфорилирование субстратов ДНК и РНК
• Дефосфорилирование белка