Добавление стоп-раствора серной кислоты изменяет цвет на желтый, что позволяет точно измерить интенсивность при 450 нм с помощью спектрофотометра или планшетного ридера. Эта конкретная формула используется в большинстве наборов Thermo Scientific Pierce ELISA, где она обеспечивает постоянную производительность для метода сэндвич-ELISA.

Характеристики раствора субстрата TMB:

• Номер продукта: N301
• Размер: 100 мл (достаточно примерно для десяти 96-луночных микропланшетов)
• Хранение : отправляется на холодных пакетах. Хранить при температуре 2-8 °C сразу после получения. Не использовать продукт по истечении указанного срока годности.
• Применение: ELISA: рекомендуется для иммуноферментного анализа на основе пероксидазы. При окислении TMB образует водорастворимый синий продукт реакции, который можно измерить спектрофотометрически при 605 нм. При подкислении продукт реакции становится желтым с пиком поглощения при 450 нм.
• Меры предосторожности: этот продукт чувствителен к загрязнению различными окислителями. Чтобы избежать загрязнения и преждевременного истечения срока годности, избегайте контакта раствора ТМБ с любым потенциальным источником загрязнения. Никогда не пипетируйте непосредственно из бутылки. Вылейте необходимое количество в пробирку и пипетируйте из пробирки. Не возвращайте избыток ТМБ в первичный контейнер для хранения.

Процедура:
• Добавьте 100 мкл субстрата ТМБ в каждую лунку, содержащую пероксидазную реакцию.
• Инкубируйте при комнатной температуре в течение 15–30 минут.
• Добавьте 100 мкл стоп-раствора (0,16 М серной кислоты, N600 ) в каждую лунку.
• Измерьте поглощение при 450 нм.