Набор для выделения общей нуклеиновой кислоты RecoverAll™ Total Nucleic Acid Isolation Kit для FFPE предназначен для извлечения общей нуклеиновой кислоты из тканей, фиксированных формалином или параформалином и залитых парафином (FFPE). В комплект входят реагенты, достаточные для 40 очисток из четырех 20-мкм срезов или до 35 мг неразделенных основных образцов каждый. Особенности набора для выделения полных нуклеиновых кислот RecoverAll™ для FFPE:

• Оптимизирован для выделения полных нуклеиновых кислот, включая микроРНК, из ткани FFPE
• Не требуется ночного расщепления протеиназой К — депарафинируйте утром и проводите ОТ-ПЦР днем
​​• Типичный выход составляет >50% от выхода нефиксированной ткани
• Восстановленные нуклеиновые кислоты подходят для секвенирования следующего поколения, ОТ-ПЦР в реальном времени, ПЦР, скрининга мутаций и анализа микрочипов

Извлечение нуклеиновых кислот из сложных образцов
Архивированные образцы тканей содержат ценную информацию о состояниях заболеваний, но традиционно было сложно выделить из них нуклеиновые кислоты качества, подходящего для молекулярного анализа. Стандартные методы консервации используют формалин, который сохраняет структуру ткани и предотвращает гниение, но который также улавливает нуклеиновые кислоты и модифицирует их посредством сшивок белок-белок и белок-нуклеиновая кислота. РНК (и в некоторой степени ДНК) часто настолько фрагментирована и химически модифицирована, что несовместима со многими методами молекулярного анализа. Фрагментация РНК в тканях FFPE не может быть обращена вспять; однако условия протеазного расщепления набора RecoverAll™ разработаны для высвобождения максимального количества (см. рисунок) захваченных фрагментов РНК всех размеров, включая микроРНК, за относительно короткий промежуток времени.

Решение набора RecoverAll™ Total Nucleic Acid Isolation Kit
Процедура набора RecoverAll™ Total Nucleic Acid Isolation Kit требует около 45 минут ручного времени и может быть завершена обычно менее чем за 1 день для РНК. Образцы FFPE депарафинизируются с помощью серии промывок ксилолом и этанолом. Затем они подвергаются обширному протеазному расщеплению со временем инкубации, подходящим для восстановления либо РНК, либо ДНК. Затем нуклеиновые кислоты очищаются с помощью быстрого метода стеклянного фильтра и элюируются либо в воду, либо в буфер с низким содержанием соли.

Нуклеиновые кислоты практически для любого последующего применения
Как и в случае со всеми тканями FFPE, фиксация и хранение образцов обычно вызывают фрагментацию и модификацию нуклеиновых кислот. Поэтому последующие применения, такие как анализ микрочипов, которые требуют больше чистой РНК, чем qRT-PCR, могут потребовать модификации для получения оптимальных результатов. Хотя ДНК, как правило, не фрагментируется так же легко, как РНК, она, по-видимому, более реактивна к формалину и требует более длительного (2 дня) времени переваривания протеазой для высвобождения значительного количества ДНК.