Система экспрессии Expressway™ Tag-On-Demand™ Cell-Free E. coli с технологией Lumio™ обеспечивает удобную экспрессию in vitro меченого или немеченого белка из одного вектора, обнаружение синтеза белка в реальном времени и простое обнаружение белка в геле. С помощью этой системы вы можете:

• Быстро проводить скрининг уровней экспрессии полноразмерного белка
• Экономить время и усилия, клонируя только один раз для экспрессии меченого или нативного белка
• Экспрессировать белок с C-концевой меткой из клона Ultimate™ ORF в системе in vitro

Система Expressway™ Tag-On-Demand™ включает специализированный лизат E. coli , полученный из мутанта sl yD для бесклеточного синтеза. Этот лизат устраняет неспецифическое связывание реагента обнаружения Lumio™ Green с эндогенным белком SlyD, обеспечивая оптимальный фон для обнаружения рекомбинантного белка.

Как это работает
Просто клонируйте интересующий вас ген, содержащий стоп-кодон TAG (янтарный), в предоставленный pEXP4-DEST (рисунок 1). Вектор pEXP4-DEST имеет сайты tR для эффективной рекомбинации Gateway™, C-концевые метки Lumio™ и 6xHis для упрощенной идентификации и очистки, а также компоненты для бесклеточного синтеза белка. В присутствии супрессорной тРНК Expressway™ Tag-On-Demand™ кодон TAG не распознается, и трансляция продолжается через теги Lumio™ и 6xHis. В отсутствие супрессорной тРНК стоп-кодон TAG распознается, и продуцируется нативный белок (рисунок 2). Из того же вектора вы можете быстро определить уровень экспрессии полноразмерного белка с меткой C-конца, а затем экспрессировать нативный белок без каких-либо неблагоприятных воздействий, которые метка может оказать на его структуру, активность или молекулярные взаимодействия.