Набор CellEvent Senescence Green Detection Kit состоит из флуоресцентного зонда и оптимизированного буфера, которые позволяют обнаруживать сенесцентные клетки на основе изображений. Зонд на основе флуоресцеина содержит два галактозидных фрагмента, что делает его мишенью для β-галактозидазы. Активация β-галактозидазы обычно используется в качестве биомаркера сенесцентных клеток. Этот фермент гидролазы находится в лизосомах и преобразует β-галактозиды в моносахариды в условиях кислого pH. Продукт ферментативного расщепления удерживается внутри клетки благодаря ковалентному связыванию внутриклеточных белков и испускает флуорогенный сигнал с максимумами поглощения/эмиссии 490/514 нм.

Возможности набора CellEvent Senescence Green Detection Kit включают:
• Надежное и быстрое флуоресцентное обнаружение стареющих клеток
• Более высокая чувствительность, чем у традиционного колориметрического x-gal
• Флуоресцентный сигнал хорошо сохраняется и обнаруживается с помощью стандартных наборов фильтров Alexa Fluor 488/FITC
• Поддержка мультиплекса — флуоресцентный зонд старения может быть мультиплексирован

Из-за ограниченной продолжительности репликативной жизни нормальные клетки вступают в остановку клеточного цикла, также известную как клеточное старение. Находясь в этой фазе старения, клетки остаются метаболически активными, не подвергаясь клеточной гибели или делению. Они принимают определенный фенотип, который включает появление множественных ядер, повышенную вакуолизацию, экспрессию pH-зависимой β-галактозидазы и морфологическое увеличение и расширение. Старение посредством различных механизмов может играть роль в подавлении опухоли, прогрессировании опухоли, старении и восстановлении тканей.

Активация β-галактозидазы обычно используется в качестве биомаркера для стареющих клеток. Этот фермент гидролазы находится в лизосомах и преобразует β-галактозиды в моносахариды в условиях кислого pH. Активность оптимальна при лизосомальном pH 4, но обычные анализы измеряют при pH 6. Было показано, что нормализованная активность β-галактозидазы в два раза выше в стареющих клетках, чем в пре-стареющих клетках, независимо от значения pH, используемого для тестирования.

Колориметрический субстрат для β-галактозидазы, 5-бром-4-хлор-3-индолил-β-D-галактопиранозид (x-gal), давно используется для обнаружения метаболической активности в клетках in vitro. Однако его использование ограничено из-за непостоянного сигнала, продолжительности анализа и невозможности мультиплексирования.

Поэтому мы разработали чувствительный флуоресцентный субстрат для β-галактозидазы, который можно использовать для обнаружения стареющих клеток. Зонд CellEvent Senescence Green представляет собой реагент на основе флуоресцеина, содержащий два галактозидных фрагмента, что делает его специфической мишенью β-галактозидазы. Продукт расщепления ферментом удерживается внутри клетки благодаря ковалентному связыванию внутриклеточных белков и испускает флуорогенный сигнал с максимумами поглощения/эмиссии 490/514 нм.

Набор CellEvent Senescent Green Kit содержит зонд CellEvent Senescent Green и оптимизированный буфер для обнаружения стареющих клеток в фиксированных образцах. Этот зонд может быть мультиплексирован с другими флуоресцентными реагентами, совместимыми с фиксацией параформальдегидом.