DAPI — флуоресцентный краситель, широко используемый в молекулярной биологии и исследованиях клеточной биологии. DAPI известен своей способностью связываться с ДНК, в частности с малой бороздкой двухцепочечной ДНК. Этот краситель испускает синюю флуоресценцию при возбуждении ультрафиолетовым светом, что позволяет исследователям визуализировать и окрашивать ДНК в различных биологических образцах.

Красители Hoechst — это ДНК-специфичные флуоресцентные красители, которые связываются с малой бороздкой двухцепочечной ДНК. Они испускают синюю флуоресценцию при возбуждении ультрафиолетовым светом. Эти красители широко используются для окрашивания ДНК в различных биологических образцах.

Порошки FluoroPure™ Hoechst и DAPI производятся с использованием строгих процессов очистки для минимизации примесей, которые могут помешать флуоресцентной визуализации. Это гарантирует, что DAPI и Hoechst обеспечивают надежные и последовательные результаты с минимальным фоновым шумом. Чистота реагентов FluoroPure™ делает их особенно подходящими для таких требовательных приложений, как микроскопия сверхвысокого разрешения и визуализация живых клеток, где точная и аккуратная визуализация ДНК имеет решающее значение.

DAPI (4',6-диамидино-2-фенилиндол):

DAPI 4',6-диамидино-2-фенилиндол — это синий флуоресцентный зонд, который ярко флуоресцирует при селективном связывании с малой бороздкой двухцепочечной ДНК, где его флуоресценция примерно в 20 раз больше, чем в несвязанном состоянии. Его селективность к ДНК и высокая проницаемость для клеток позволяют эффективно окрашивать ядра с небольшим фоном от цитоплазмы и эффективно контрастировать при окрашивании IHC и пространственной транскриптомике и протеомике тканей. DAPI — это классический ядерный контрокраситель для иммунофлуоресцентной микроскопии, а также важный компонент методов скрининга с высоким содержанием, требующих количественного определения содержания ДНК и сегментации на основе клеток (em/ex 341/452 нм).

DAPI в виде дилактатного порошка лучше растворяется в воде, чем дигидрохлоридная соль, и поэтому является лучшим выбором для приготовления исходных растворов в воде.

Для приготовления 5 мг/мл исходного раствора DAPI (14,3 мМ для дигидрохлорида или 10,9 мМ для дилактата) растворите содержимое одного флакона (10 мг) в 2 мл деионизированной воды (dH2O ) или диметилформамида (ДМФ). Менее растворимый в воде дигидрохлорид DAPI может потребовать некоторого времени для полного растворения в воде, и может потребоваться обработка ультразвуком.

Примечание: Ни один из этих производных DAPI не обладает хорошей растворимостью в PBS для приготовления основного раствора.

Разбавьте исходный раствор DAPI 1:5000 (или 1:1000 для 1 мг/мл DAPI 62248) в сверхчистой воде или PBS (1 мкг/мл DAPI). Отфильтруйте рабочий раствор, чтобы удалить агрегаты красителя, которые могут привести к точечному сигналу.